培养基的配制过程
培养基是用于微生物、细胞或组织培养的液体或固体营养溶液。不同的实验需求和微生物种类需要不同成分的培养基。下面是一般培养基的配制过程,适用于大多数标准实验室应用。1. 确定所需培养基类型根据培养的目的和微生物类型,首先确定培养基的类型。常见的培养基有:
[*]液体培养基(如 LB 培养基)
[*]固体培养基(如琼脂培养基)
[*]选择性培养基(如 MacConkey 培养基)
[*]分化培养基(如 XLD 培养基)
2. 准备所需原料确定培养基的配方,准备所需的化学成分和原料,常见的成分包括:
[*]氮源:如蛋白胨、酵母提取物、胰蛋白胨等。
[*]碳源:如葡萄糖、蔗糖、甘露醇等。
[*]无机盐:如氯化钠(NaCl)、硫酸镁(MgSO₄)、磷酸二氢钾(KH₂PO₄)等。
[*]氨基酸和维生素:根据需要添加。
[*]琼脂:用于固体培养基。
[*]水:通常使用蒸馏水或去离子水。
3. 称取原料根据配方要求,精确称取各个成分的质量。例如,若配制 1 L 培养基,按照配方上的比例计算并称取。
4. 溶解培养基成分
[*]将各个成分(如氮源、碳源、无机盐等)溶解在一定量的蒸馏水或去离子水中。液体培养基可以将所有成分溶解在水中,而固体培养基需要加入琼脂。
[*]如果培养基中含有琼脂,加入琼脂粉末(通常为 15 g/L),并加热至完全溶解。
5. 调节 pH 值使用 pH 计测量溶液的 pH 值,并根据需要使用稀盐酸或氢氧化钠溶液调整 pH。不同微生物或细胞对 pH 值有不同的要求,通常调整至适合的范围,例如:
[*]细菌培养:pH 通常在 7.0 左右。
[*]真菌培养:pH 通常在 5.5 - 6.5 之间。
6. 灭菌
[*]液体培养基:使用高压蒸汽灭菌(121°C,15-20分钟)来灭菌。通常通过高压灭菌器(高压锅)进行。
[*]固体培养基:灭菌过程类似,但需要注意不要过度加热,以免琼脂溶液蒸发或变质。
7. 培养基冷却与倒板
[*]液体培养基:灭菌后,冷却至室温,可以直接装瓶或分装到小瓶中。
[*]固体培养基:在琼脂溶液冷却至约 50-55°C 时,倒入培养皿中,形成固体培养基。此时需要避免空气中的污染物进入。
8. 储存与使用
[*]液体培养基:一般保存于冰箱中,避免长时间暴露在空气中,以防污染。
[*]固体培养基:保存于室温下,避免过热或过湿。可在使用前保持适当的干燥条件。
注意事项:
[*]无菌操作:整个培养基配制过程需要在无菌条件下进行,特别是在添加液体成分、调节 pH 和灭菌后操作时,应确保使用无菌的工具和容器。
[*]添加特殊成分:如果培养基需要添加抗生素、指示剂或其他特殊成分,这些通常在培养基灭菌后进行,以防止高温降解。
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