c18液相色谱柱的活化步骤
C18液相色谱柱的活化步骤主要包括用有机溶剂冲洗、纯水流通、有机溶剂与水混合物流通以及最终洗涤。以下是具体介绍:1、有机溶剂冲洗:使用适当比例的有机溶剂,如甲醇或乙腈,对新购得的C18液相色谱柱进行初步洗涤。通常建议使用3~5倍柱体积的甲醇进行冲洗,以去除可能存在的杂质和保存液。
2、纯水流通:在有机溶剂冲洗后,通过柱子流通纯水约20~30分钟。这一步骤旨在去除残留的有机化合物和其他杂质,同时保持柱子的湿润状态,避免填料干裂。
2、有机溶剂与水混合物流通:接着,可以通过柱子流通一定比例的有机溶剂与水的混合物,例如70%乙腈加30%水。这有助于逐渐增加有机相的浓度,从而保护柱子免受突然的溶剂冲击。
3、终洗涤:在完成上述步骤后,使用柱洗涤液(一定比例的有机溶剂溶解样品)通过柱子,以去除样品残留。最后,再次洗涤柱子,确保消除任何残留的溶液,或将其存放在一定缓冲液/有机溶剂中,直至再次使用。
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