TA的每日心情 | 擦汗
5 天前 |
|---|
签到天数: 1 天 [LV.1]初来乍到
助理技师
- 积分
- 14
|
细胞计数是生物学实验中常见的步骤，特别是在细胞培养、免疫学研究、药物筛选等领域。常见的细胞计数方法可以分为直接计数法和间接计数法两大类，每种方法都有其优缺点，适用于不同的实验需求。以下是一些常见的细胞计数方法：
一、直接计数法
1. 台盼蓝染色法
- 原理：台盼蓝是一种染料，可将死亡细胞染成蓝色，活细胞则不吸附台盼蓝。通过显微镜观察染色后的细胞，区分活细胞和死细胞。
- 优点：操作简单，结果快速。
- 缺点：不适用于细胞浓度较高的样本，可能需要较多的样本稀释。
2. 血球计数板法（改良血球计数板法）
- 原理：使用带有标准刻度的玻璃血球计数板（如 Neubauer 计数板），通过显微镜直接计数细胞的数量。计数时会在一定的区域内计数细胞数量，再根据稀释倍数计算总细胞数。
- 优点：简便、快速，成本低。
- 缺点：对细胞悬液的浓度有一定要求，操作时需要技巧，可能产生误差。
3. 显微镜计数法
- 原理：直接使用显微镜观察细胞，通过人工计数每个视野下的细胞数量。常用于细胞悬浮液的计数。
- 优点：直观，可精准观察单个细胞。
- 缺点：效率较低，适用于细胞浓度较低的样品。
二、间接计数法
1. 细胞计数器（自动细胞计数仪）
- 原理：自动细胞计数仪（如 Coulter Counter）通过电阻变化原理来计数细胞。细胞通过仪器的微孔时，阻挡电流流动的变化被记录下来，从而判断细胞的数量。
- 优点：高效、准确，适用于大量样本的计数，尤其是当样品浓度较高时。
- 缺点：仪器费用较高，需要专用设备和操作。
2. 流式细胞术（Flow Cytometry）
- 原理：流式细胞仪通过激光束照射细胞，并测量细胞对激光的散射光和荧光的反应。流式细胞术不仅可以计数细胞，还可以分析细胞的大小、形态、表面标记等特征。
- 优点：可以获得细胞的多维度信息（如活性、大小、表面标志等），准确且高效。
- 缺点：设备成本高，操作需要专门的技术人员。
3. MTS/PMS法（比色法）
- 原理：MTS（3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-5-(3-硝基苯)-2-氯)-2,5-二氮杂氮代-4-三唑琥珀酸盐）反应与细胞活性有关，细胞代谢的改变（如通过代谢活性）会导致颜色的变化，可以通过比色法定量。
- 优点：适用于细胞活性监测和增殖研究，操作简便。
- 缺点：只能反映细胞代谢活性，无法准确反映细胞总数。
4. MTT法
- 原理：MTT试剂通过与活细胞内的酶反应，转化为紫色的甲臜。通过比色计或者酶标仪测定吸光度，间接推测细胞数。
- 优点：测定细胞存活率和增殖能力，可用于药物筛选。
- 缺点：无法计数死细胞，可能受培养基和试剂的影响。
三、其他特殊方法
1. 荧光显微镜法
- 原理：通过荧光染料（如Hoechst、DAPI等）染色细胞核或细胞其他结构，荧光显微镜下观察，使用计算机辅助分析计数细胞数量。
- 优点：可以高效区分细胞的不同亚群体，适用于特殊标记的细胞。
- 缺点：需要使用荧光染料和荧光显微镜，成本较高。
2. 克隆形成试验（Colony Formation Assay）
- 原理：这种方法通过种植单个细胞，观察它们是否能在适当的培养条件下形成克隆。每个克隆代表一个原始细胞。
- 优点：可评估细胞的增殖能力。
- 缺点：过程繁琐，周期较长。 |
|
发表于 
发表于 