色谱柱的活化与维护

ninali

　　色谱柱作为高效液相色谱仪的主要部件，其性能直接影响到被测物质的分离与测定效果。因此，色谱柱的活化与维护是确保分析结果准确性、重复性及色谱柱长期稳定运行的重要环节。
　　一、色谱柱的活化目的
　　1、去除杂质：活化能够去除色谱柱内残留的溶剂、水分以及低沸点杂质，这些杂质可能影响后续分析的准确性，导致峰形畸变、基线漂移。
　　2、提高惰性：通过活化，减少色谱柱对样品组分的吸附或化学反应的可能性，从而提高色谱柱的惰性，使得分析结果更加可靠。
　　3、增强热稳定性：对于气相色谱而言，活化过程有助于提升固定液在高温下的稳定性和耐久性，有利于长期稳定运行。
　　4、恢复柱效：对于长时间未使用或经过多次分析后性能下降的色谱柱，活化是恢复其初始分离效能的有效手段。
　　5、延长使用寿命：定期且正确的活化维护可以显著延长色谱柱的使用寿命，降低因污染或性能衰退导致的频繁更换成本。
　　二、色谱柱的活化步骤
　　1、反相色谱柱
　　初始冲洗：使用甲醇或乙腈（两者都是常用的有机溶剂）冲洗色谱柱，冲洗体积通常是柱体积的20至30倍，以润湿固定相，去除可能存在的污染物或残余溶剂。
　　过渡冲洗：如果流动相中含有缓冲盐，需用与流动相中盐浓度相等比例的超纯水和有机相（如甲醇或乙腈）进行混合冲洗，冲洗量也是柱体积的20至30倍。这有助于平稳地将柱子从纯有机相转移到含水的流动相环境。
　　平衡：完成过渡冲洗后，继续用最终的流动相平衡色谱柱，直到压力基线稳定。如果基线不稳定，应延长平衡时间。
　　2、正相色谱柱
　　对于新的正向色谱柱，仅需要使用正己烷或异丙醇冲洗色谱柱，冲洗体积也是柱体积的20至30倍，最后按方法流动相平衡色谱柱。
　　3、离子交换色谱柱
　　新柱先用甲醇或乙腈冲洗20个柱体积，然后转换到适合的离子强度和pH值的流动相进行平衡。
　　特殊功能化反相柱
　　如氨基柱、氰基柱等，如果原本保存在正相流动相中，转为反相使用时，需先用异丙醇或乙醇冲洗50-100个柱体积，以转换其相态。
　　三、色谱柱的日常保存
　　反相柱：应保存在甲醇或乙腈中。
　　正相柱：可保存在异丙醇或正己烷中。
　　离子交换柱：可保存在甲醇，或大于40%的有机相中，避免使用缓冲盐保存。
　　四、色谱柱的清洗和再生
　　1、反相C18色谱柱
　　清洗：每天柱子使用完后，立刻冲洗。如果使用缓冲液，必须先用相同比例的有机相/水冲洗20个柱体积，然后再转换到有机相冲洗20个柱体积。
　　再生：用水、甲醇、甲醇、水分别冲洗20个柱体积，在第一次用水时，进样5次200μL二氯亚砜DMSO。
　　2、正相色谱柱
　　清洗：每次清洗都用低流速起步，先用10柱体积不含添加剂的流动相中的弱溶剂（如正己烷、氯仿）反冲色谱柱，再用20柱体积的强溶剂（如二氯甲烷或异丙醇）反冲色谱柱。
　　再生：用四氢呋喃、甲醇、四氢呋喃、二氯甲烷、正己烷分别冲洗20个柱体积。
　　3、离子色谱柱
　　清洗：用水冲洗30个柱体积去除盐，然后用甲醇或乙腈冲洗20个柱体积后保存在50%甲醇或乙腈中。
　　再生：先用高浓度盐的缓冲液清洗，然后再用水洗、乙腈或甲醇清洗，再用50%乙腈或甲醇保存。

无药可救

这篇帖子让我收获颇丰，谢谢作者。

唯有一剑

楼上，好文，收藏备用，感谢分享！

又到周末啦

您的分享非常有价值，感谢您为我们的社区做出贡献。