菌落总数的测定方法

迅数科技

　　菌落总数的测定方法主要包括以下步骤：
　　1、样品处理和稀释
　　无菌操作：取检样25g（或25ml），放于225mL灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨制成1:10的均匀稀释液。
　　固体检样：在加入稀释液后，最好置灭菌均质器中以8000~10000r/min的速度处理1min，制成1:10的均匀稀释液。
　　稀释液制备：用1ml灭菌吸管吸取1:10稀释液1ml，沿管壁徐徐注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇试管混合均匀，制成1:100的稀释液。
　　递增稀释：另取1ml灭菌吸管，按上项操作顺序，制10倍递增稀释液，如此每递增稀释一次即换用1支1ml灭菌吸管。
　　2、倾注培养
　　选择稀释度：根据标准要求或对污染情况的估计，选择2~3个适宜稀释度，分别在制10倍递增稀释的同时，以吸取该稀释度的吸管移取1ml稀释液于灭菌平皿中，每个稀释度做两个平皿。
　　倾注培养基：将凉至46℃营养琼脂培养基注入平皿约15ml，并转动平皿，混合均匀。同时将营养琼脂培养基倾入加有1ml稀释液（不含样品）的灭菌平皿内作空白对照。
　　3、培养和计数
　　培养条件：待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养48±2h，取出计算平板内菌落数目，乘以稀释倍数，即得每克（每毫升）样品所含菌落总数。
　　计数方法：菌落计数时，从低稀释度的平板开始计数。若所有平板上的菌落数均小于30CFU，则需计数所有平板上的菌落数，但仅采用最接近30CFU的两个平板的菌落数来计算最终菌落数。
　　4、结果报告
　　报告方式：菌落数小于100CFU时，按“四舍五入”原则修约，以整数报告。菌落数大于或等于100CFU时，第3位数字采用“四舍五入”原则修约后，取前2位数字，后面用0代替位数；也可用10的指数形式来表示，按“四舍五入”原则修约后，采用两位有效数字。
　　特殊情况：若所有平板上为蔓延菌落而无法计数，则报告菌落蔓延。若空白对照上有菌落生长，则此次检测结果无效。称重取样以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/mL为单位报告。
　　在进行菌落总数测定时，需要严格遵守无菌操作规程，以避免外部污染对结果的影响。此外，培养箱的条件应根据具体的实验要求进行设置和控制，以确保培养环境的稳定性和准确性。

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